DWD-1 UV Detector (hiệu suất cao Double Beam Dual Wave Bước sóng) Tích hợp xử lý dữ liệu

Phạm vi bước sóng: 254nm, 280nm (phát hiện đồng thời), tùy chọn hai bước sóng phát hiện đồng thời giữa các vạch phổ 254nm, 280nm-400nm.

* Tính năng dụng cụ DWD-1

Xác định bước sóng kép của protein 280nm/254nm:

Các phân tử protein chứa các axit amin thơm như tyrosine, tryptophan và các liên kết đôi liên hợp. Chúng có tính chất hấp thụ ánh sáng cực tím, đỉnh hấp thụ của chúng ở bước sóng 280nm, và giá trị mật độ ánh sáng của đỉnh hấp thụ tỷ lệ thuận với nồng độ của nó trong bước sóng này, do đó có thể được sử dụng làm cơ sở để xác định định tính, định lượng protein, vì lý do này, phương pháp hấp thụ UV ở 280nm thường được sử dụng để theo dõi liên tục nồng độ protein trong hệ thống phân loại. Nhưng vì hàm lượng tyrosine và tryptophan của các protein khác nhau, do đó, để định lượng chính xác, cần phải đo sản phẩm tinh khiết của protein làm tiêu chuẩn để so sánh, hoặc đã biết hệ số tiêu thụ của nó làm tham chiếu. Ngoài ra, nhiều chất không phải protein cũng có khả năng hấp thụ xác định ở bước sóng 280nm, có thể gây nhiễu. Trong đó đặc biệt ảnh hưởng của axit nucleic (purine và pyrimidine) nghiêm trọng hơn. Hấp thụ mạnh hơn 10 lần (mỗi gram) so với protein ở 280nm, nhưng axit nucleic được hấp thụ mạnh hơn ở 254nm và đỉnh hấp thụ của nó là gần 254nm. Hệ số tuyệt chủng ở 254nm của axit nucleic gấp 2 lần ở 280nm,

Trong khi protein thì ngược lại, giá trị hấp thụ UV 280nm lớn hơn giá trị hấp thụ 254nm.

Thông thường：

Tỷ lệ hấp thụ ánh sáng của protein tinh khiết: A280/A254 "1,8

Tỷ lệ hấp thụ ánh sáng của axit nucleic tinh khiết: A280/A254 "0,5"

Do đó, khi có axit nucleic trong dung dịch protein (như hầu hết các hệ thống sinh học), OD254nm và OD280nm phải được xác định đồng thời. Hàm lượng thực sự của protein sau đó được điều chỉnh bằng một công thức thực nghiệm để loại bỏ ảnh hưởng của axit nucleic, dựa trên tỷ lệ hấp thụ của cả hai bước sóng.

Nồng độ protein=1,45 × A280-0,74 × A254 (mg/ml)

Công thức thực nghiệm này được xây dựng dựa trên dữ liệu được xác định từ một loạt các hỗn hợp protein với tỷ lệ nồng độ khác nhau được biết đến (men enolidase) và axit nucleic (men nucleic acid).