Hệ thống phân tách sắc ký lỏng áp suất thấp Phạm vi áp dụng: nghiên cứu khoa học và chuẩn bị trong hóa sinh, hóa học tổng hợp, sản phẩm tự nhiên, phát triển dược phẩm, hóa học thực phẩm, hóa học nông nghiệp, mỹ phẩm, polymer và hóa dầu và các ngành công nghiệp khác. Có thể tiến hành phân loại trao đổi ion, phân loại lọc gel ái lực, phân loại hành động kỵ nước và các phương pháp khác, được sử dụng cho protein, enzyme, axit nucleic, nucleotide, polypeptide, (có/không có axit amin thơm) và bất kỳ mẫu sinh học/phi sinh học nào khác có sự hấp thụ UV, phân tích dòng chảy, là sự lựa chọn lý tưởng cho tinh khiết phân tử sinh học, nó có nhiều chức năng, dễ sử dụng, kinh tế và các đặc điểm khác. Thiết kế nhỏ gọn, tiết kiệm tối đa không gian trong kho lạnh và phòng thí nghiệm.

Ghi chú

Các yêu cầu chỉ số kỹ thuật khác nhau của máy kiểm tra tia cực tím chùm tia kép hiệu suất cao trong cấu hình hệ thống được sử dụng để kiểm tra định lượng thuốc tại nhà máy dược phẩm quốc gia. Tính năng thiết bị dụng cụ

Xác định bước sóng kép 280nm/254nm cho protein

Các phân tử protein chứa các axit amin thơm như tyrosine, tryptophan và các liên kết đôi liên hợp. Chúng có tính chất hấp thụ ánh sáng cực tím, đỉnh hấp thụ của chúng ở bước sóng 280nm, và giá trị mật độ ánh sáng của đỉnh hấp thụ tỷ lệ thuận với nồng độ của nó trong bước sóng này, do đó có thể được sử dụng làm cơ sở để xác định định tính, định lượng protein, vì lý do này, phương pháp hấp thụ UV ở 280nm thường được sử dụng để theo dõi liên tục nồng độ protein trong hệ thống phân loại. Nhưng vì hàm lượng tyrosine và tryptophan của các protein khác nhau, do đó, để định lượng chính xác, cần phải đo sản phẩm tinh khiết của protein làm tiêu chuẩn để so sánh, hoặc đã biết hệ số tiêu thụ của nó làm tham chiếu. Ngoài ra, nhiều chất không phải protein cũng có khả năng hấp thụ xác định ở bước sóng 280nm, có thể gây nhiễu. Trong đó đặc biệt ảnh hưởng của axit nucleic (purine và pyrimidine) nghiêm trọng hơn. hấp thụ ở 280nm mạnh hơn 10 lần (mỗi gram) so với protein, nhưng

Sự hấp thụ axit nucleic mạnh hơn ở 254nm và đỉnh hấp thụ của nó là gần 254nm. Hệ số tuyệt chủng ở 254nm của axit nucleic cao gấp 2 lần ở 280nm, trong khi protein thì ngược lại, hấp thụ tia cực tím 280nm lớn hơn giá trị hấp thụ 254nm.

Thông thường

Tỷ lệ hấp thụ ánh sáng của protein tinh khiết: A280/A254 "1,8

Tỷ lệ hấp thụ ánh sáng của axit nucleic tinh khiết: A280/A254 "0,5"

Do đó, khi có axit nucleic trong dung dịch protein (như hầu hết các hệ thống sinh học), OD254nm và OD280nm phải được xác định đồng thời. Hàm lượng thực sự của protein sau đó được điều chỉnh bằng một công thức thực nghiệm để loại bỏ ảnh hưởng của axit nucleic, dựa trên tỷ lệ hấp thụ của cả hai bước sóng.

Nồng độ protein=1,45 × A280-0,74 × A254 (mg/ml)

Công thức thực nghiệm này được xây dựng dựa trên dữ liệu được xác định từ một loạt các hỗn hợp protein với tỷ lệ nồng độ khác nhau được biết đến (men enolidase) và axit nucleic (men nucleic acid).

Cấu hình hệ thống